细胞加药真的很让人头疼,加多了不要几个小时,细胞就到了了无生机的地步,加少了根本没办法实现自己的理想的模型,药物的有效性和安全性与细胞内药物的浓度密切相关。因此,掌握细胞内药物浓度的计算方法对于药物研究至关重要。
1. 正常的我们都按照以下计算公式给细胞加药:
细胞内药物浓度 = 给药浓度 × 细胞摄入率 × 细胞量 / 细胞体积
那么细胞给药我们需要确定哪些呢,别急,听我慢慢道来:
一、确定单体组分的化学性质,是亲水的还是亲脂性的;
常见的溶剂有水、醇、DMSO,丙酮,一般DMSO溶解的药要稀释1000倍才能用,因为这个浓度下才能剔除溶剂本身的毒性作用。以最大溶解浓度,稀释1000倍作为最高浓度,然后依次稀释。如果药物有抑制作用,需采用改良寇氏法,算出一个IC50值,初步可以确定给药的最大和最小剂量。
改良寇式法:lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)
Xm:lg 最大剂量
I:lg(最大剂量/相临剂量)
P:阳性反应率之和
Pm:最大阳性反应率
Pn:最小阳性反应率
举个例子:各组浓度0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001,稀释倍数为10,最大浓度为0.1,抑制率为0.95、 0.80、0.65、0.43、0.21,0.06。代入
计算公式:
Pm=0.95
Pn=0.06
P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1
Xm=lg0.1=-1
lgI=lg0.1/0.01=1
lgIC50=-1-1*(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025
IC50=0.00025
二、药物的添加方式
目前分为溶液添加和细胞膜添加两种方式,第一种方式简单,但可能会影响细胞的结构和功能,细胞膜添加的方式则更加有效地显示药物在细胞内的特定功能。
三、一定要考虑药物的添加时间
药物的添加时间应该足够长,以便药物有足够的时间发挥作用,同时也应该考虑到实验的稳定性,以避免细胞产生的变异,同时需要考虑给药的次数,是一次性给药还是分多次给药,一次性给药可以有效地影响细胞的表型,但其结果可能不太稳定;多次给药可以稳定影响细胞的表型,但结果可能不太明显。