购买细胞通常是培养基中常温寄送过来的,接收后观察细胞是否贴壁(需要看说明书,细胞是否是贴壁的或者悬浮的),状态是否正常;如果是冻存干冰寄送,则需注意是否干冰已完全挥发,细胞是否被污染。
一:消化
1、显微镜观察细胞是否已长到70%以上,提前在生物安全柜准备好离心管,移液枪,胰酶,PBS,按照说明书制备好的新培养基;
2、将瓶中的培养基吸出,暂放到离心管中。使用PBS润洗底部2-3遍,然后倒掉PBS;
3、对于贴壁细胞,需要加入少量的胰酶进行消化,将瓶子放入培养箱1-2min,在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
4、1000RPM 条件下离心4-5分钟,倒掉上清;根据需要,进行下一步操作:
传代:加入1ml新的培养基重悬细胞,然后分装到不同细胞瓶,加入足量的培养基,备注好传代信息,放到培养箱,按照说明书设置培养条件,每日观察生长情况;
冻存:加入1ml冻存液重悬细胞,装到冻存管中,管壁备注好细胞信息,放入-80冰箱过夜再放到液氮罐冻存;
注射:加入PBS重悬,洗2-3次,根据注射细胞量和浓度加PBS,放到碎冰上,1-2小时内给实验动物注射。
二、复苏
1、将细胞管从液氮或者-80冰箱取出,在37℃水浴锅中迅速晃动1-2min解冻;
2、加入 4mL 培养基混合均匀,在 1000RPM 条件下离心4 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养基后吹匀;
3、然后将所有细胞悬液加入放有足量培养基的培养瓶中培养过夜,第二天检查细胞密度。
三、寄送
1、如细胞冻存在液氮或者-80冰箱,直接使用干冰寄送即可;
2、如果是复苏培养好的细胞,直接培养基常温寄送即可;
3、如果是需要进行注射,可以将细胞管放在碎冰上尽快寄送,1-2小时内送到并进行注射。
四、注意
1、仔细看细胞的说明书,不同细胞要用的培养基,培养的条件也是不一样的;
2、全程需要注意无菌操作,瓶盖放置高处,打开瓶盖后不能触碰瓶口或者从瓶盖或敞口上方经过;重悬细胞时尽量避免气泡产生;
3、接收后建议更换运输用的培养基 (灌液培养基),请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1:2传代;
4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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