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H2S 含量测定试剂盒说明书

作者:上海研谨生物科技有限公司 2019-04-17T00:00 (访问量:2006)

 H2S 含量测定试剂盒说明书

可见分光光度法 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

产品内容:

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。试剂四:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。

试剂五:液体 3mL×1 管,4℃避光保存。

产品说明:

H2S 是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。

H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在

665nm 处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、可见分光光度计 1ml 玻璃比色皿、蒸馏水。

操作步骤:

一、样品处理:

1. 组织:按照组织质量(g:提取液体积(mL) 15~10  的比例(建议称取约 0.1g  组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆,然后 10000g4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量10 4 :提取液体积mL)为 500~10001  的比例(建议

500  万细胞加入 1mL  提取液,冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3  秒,间隔 7

秒,总时间 3min;然后 10000g4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清(浆:直接测定。

二、测定步骤: (取 1.5ml 离心管,按照下表操作)

 

空白管

测定管

样品(μL

 

250

H2OμL

250

 

试剂一(μL

250

250

充分震荡混匀

试剂二(μL

250

250


12000rpm4℃,离心 10min,去上清,留沉淀

H2OμL

500

500

12000rpm4℃,离心 10min,去上清,留沉淀

试剂一(μL

250

250

试剂三(μL

250

250

充分震荡混匀

试剂四(μL

250

250

12000rpm4℃,离心 10min,取上清

试剂五(μL

50

50

混匀,25℃静置20min,于微量石英比色皿/96孔板中,空白管调零,测定665nm吸光值,

记为A665

 

三、H2S 含量计算公式:

标准曲线回归方程为:y = 0.0044xR2 = 0.9988

1)组织样品

a.按照蛋白浓度计算

H2Sμmol/mg prot= A665÷0.0044×V 反总÷(V ×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr

b.按照样本重量计算

H2Sμmol/g= A665÷0.0044×V 反总÷(V ÷V 样总×W)×10

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