产品推荐│耐热SSB助您的PCR产量更高更快
在PCR扩增实验过程中,双链DNA解链是必不可少的一步,解开的单链DNA会重新配对形成双链DNA或自身形成发夹结构,又或者被降解,导致不能稳定扩增DNA。为解决这个问题,单链DNA结合蛋白(single-stranded DNA-binding protein, SSB)就应运而生了。
SSB具有高度的亲和力,能够迅速结合到DNA 的单链上,形成SSB-DNA复合体防止DNA再结合成双链,使螺旋二聚体变得不稳定,促进引物和聚合酶与目标DNA的结合,从而提高PCR的产量。正因如此,SSB蛋白被广泛地用于各种基于PCR技术的PCR、RT-PCR、DNA测序等领域。
图1.SSB结合ssDNA示意图
(图片源自:DOI: 10.1038/4611067a.)
PCR扩增必须经历高温变性过程,这要求SSB蛋白具有热稳定性,能够在高温条件下仍然保持活性。为满足这一需求,翌圣通过ZymeEditor™酶改造平台对来源于嗜热细菌的SSB进行重组表达,获得高纯度耐高温的SSB(Cat#14561ES)。翌圣SSB能够在高温条件下保持稳定的结构与功能,具有提高PCR反应的产量和特异性、提高RT-PCR中反转录的产量和延伸能力以及改善强二级结构区域的DNA测序的特点。
部分数据展示
01
无外切酶、切口酶残留
将0.5、2 μg的SSB分别与底物DNA在37℃孵育4 h,琼脂糖凝胶电泳检测DNA谱带不发生变化,表明SSB无外切酶及切口酶残留。
图2. 外切酶和切口酶残留检测
02
无RNase残留
将0.5 μg的SSB与底物RNA在37℃孵育4 h,琼脂糖凝胶电泳检测RNA谱带不发生变化,表明SSB无RNase残留。
图3. RNase残留检测