GV3101(pSoup-19)感受态细胞

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1.  产品简介：

基 因 型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR)Nopaline(pSoup-p19-tetR)

p19蛋白来源于番茄丛矮病毒，可抑制宿主对外源基因的RNA沉默效应，提高异源基因转录本的稳定性，进而促进异源蛋白的表达，广泛应用于转基因植物及烟草叶片，拟南芥叶片，番茄叶片或原生质体的瞬时表达系统中。GV3101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因 (vir基因是TDNA插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签：gent，赋予

GV3101菌株庆大霉素抗性；在GV3101菌株中转入help质粒：pSoup-p19即为GV3101(pSoup-p19)菌株，可帮助pGreen，62SK，pGs2等质粒在农杆菌中复制，同时赋予该菌株四环素（tet）抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。GV3101(pSoup-p19)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301(卡那霉素抗性)质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，静置冰浴30min。
3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中静置2-3min，该过程不要摇动离心管。
4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床， 150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。
5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．感受态细胞最好在冰中缓慢融化，8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2．混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3．转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

*本试剂仅供实验室研究使用