血液基因组DNA提取试剂盒（0.1-1ml)

中文名称：血液基因组DNA提取试剂盒（0.1-1ml)
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from blood（0.1-1ml)
产品规格：50次|200次
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取血液中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DN**段大，纯度高，质量稳定可靠。

产品特点：
·样本适用广泛：可从抗凝血（EDTA，肝素等）、白膜层和血凝块等样品中直接提取基因组DNA；
·高质量：独特的裂解缓冲体系，纯化的DNA具有高浓度，高纯度，完整性好等特点，满足芯片杂交，高通量测序等实验需求；
·快速无毒：采用硅胶膜吸附原理，无需酚/氯仿，1h内即可完成实验。
·应用范围广：适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等各种常规实验，和芯片杂交、高通量测序等下有实验。

提取实例：

用本试剂盒提取不同体积血液基因组，1%琼脂糖凝胶，6V/cm，电泳20min，Marker为λDNA/Hind III。

提取得率：

试剂盒组成：

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

自备试剂：RNase A（100mg/ml) （目录号：WH0217)，异丙醇，乙醇

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DN**段较小、提取量下降。
2．若缓冲液GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
3．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

使用方法：
使用前先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．处理血液材料（本产品适用于处理已添加抗凝剂的100μl-1ml血液样品）：
  a.当血液样品体积小于200 μl时，可加缓冲液GS补足体积至200 μl，再进行下一步实验（如血液样品体积为200 μl，可直接进行下一步实验，不需加入GS)。
  b.当血液样品体积超过200 μl时，需用细胞裂解液CL处理，具体步骤如下：
  在样品中加入1-2.5倍体积的细胞裂解液CL，颠倒混匀，10000rpm（~11500×g )离心1 min，吸去上清，留下细胞核沉淀（如果裂解不彻底，可重复以上步骤一次），向离心收集到的细胞核沉淀中加200 μl缓冲液GS，振荡至彻底混匀。
  c.如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5-20 μl，可加缓冲液GS补足200 μl后进行下面的裂解步骤。
  注意：如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100mg/ml）溶液（目录号：WH0217），振荡15 sec，室温放置5 min。
2．加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。
3．加200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，56℃放置10min，其间颠倒混匀数次，溶液应变清亮（如溶液未彻底变清亮，请延长裂解时间至溶液清亮为止）。
  注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般37℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积≤200 μl且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。
4．加200 μl无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
5．将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱CB3放入收集管中），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
6．向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7．向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8．重复操作步骤7。
9．12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10．将吸附柱CB3转入1.5 ml离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加50-200 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2-5 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min，将溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min。洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DN**段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DN**段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！