cDNA第一链合成试剂盒

产品及特点

本试剂盒提供合成cDNA第一链所需要的全部试剂。其原理是用莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MLV RT）高效合成mRNA的全长cDNA拷贝。在基因特异性引物存在条件下，此单链cDNA产物可直接用来进行PCR扩增，或进行其它下游操作，包括合成cDNA第二条链、构建cDNA文库、核酸杂交等。基于Oligo(dT)引物的cDNA合成原理如下：

1. 使用突变的反转录酶，内源RNase H活性低。

2. 最长可合成13 Kb的cDNA。

3. 可以使用oligo-dT、随机引物和RNA专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提供）。

4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA均可作为模板。

5. 可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。

使用及效果

在无菌管中加入1-10 μ L（1 ng-2 μ g）总RNA ，1 μ L引物，加无核酸酶污染水补至13 μL，70℃加热5分钟后立即冰浴，再加入5 uL RT Buffer（含dNTP），37℃保温5分钟。继续向反应液中加入2 μ L M-MLV反转录酶（含RI），反应终体积 为20 μ L。42℃温育1小时。70℃ 保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。反应产物即为cDNA。