产品介绍：

别藻蓝蛋白(Allophycocyanin ,APC)是一种从红藻中提纯的高亮度藻胆蛋白，属于远红色荧光，具有很高的量子产量。激光594 nm和633 nm处激发其发光，在650 nm处吸收峰最大，在660 nm处荧光发射峰最大。APC比普通的化学发光强100倍，在普通应用中，其至少可以提高灵敏度5-10倍，主要用于流式细胞术、微阵列分析、ELISAs等。APC主要优点是发射长波荧光，抗淬灭性强，高水溶性，均质结构，分子量确定。

基本原理：

本试剂盒利用抗体和APC上游离的氨基，采用定向对接偶联技术将抗体分子与APC共价偶联，主要特点：

ü  试剂盒组分齐全，操作简单，只要按照操作步骤进行便可得到高品质APC偶联抗体；

ü  本试剂盒所配置的APC为高纯度，高活性荧光蛋白，荧光发光效率更高；

ü  本试剂采用定向偶联技术，荧光蛋白和抗体都不会发生自连，保证偶联物的特异性和均一性；

ü  试剂盒所使用的交联剂增加了延长臂，确保不会因为蛋白质位阻而影响发光效率；

ü  鉴于APC的蛋白骨架特性，其抗淬灭能力更强。

试剂盒已经提供材料：

ü  APC蛋白             1mg*1支  可用于标记0.5mg抗体

ü  APC蛋白活化试剂     2mg*1支  使用时加ddH2O 200ul

ü  标记缓冲液          30ml*1瓶

ü  抗体修饰试剂        2mg*1支 使用时加ddH2O 1000ul

ü  30KMWCO超滤管       3支

ü  封闭试剂            2mg*1支 使用时加DMSO 200ul

ü  DMSO溶剂             1ml*1支

ü  说明书               1份

其他需要自备试剂材料：

2  待标记的生物分子；

2  移液器及吸头；

2  去离子水。

试剂盒储存

试剂盒放在-20˚C可保存6个月以上。

试剂盒操作流程：

1a.抗体的修饰 与1b.APC的活化两个步骤同时进行

1a.抗体的修饰

1）抗体修饰试剂溶解于ddH2O配制成2mg/ml的抗体修饰试剂溶液。

2）取待标记抗体（纯度>90%），浓度调整到 5mg/ml以上为宜，按照每毫克抗体加入5μl 抗体修饰试剂溶液，轻轻混匀，在室温下搅拌反应 60-90分钟。

3）超滤管内芯添加标记缓冲液，通过超滤管多次离心置换溶液，去除多余抗体修饰试剂，超滤管内芯收集液为修饰抗体，并调节浓度至 3mg/ml。

1b.APC蛋白的活化

1）取APC蛋白悬液4℃ 12,000rpm 离心 5 分钟 ,小心吸掉上清，尽量不留残液；

2）底部沉淀用标记缓冲液重新溶解沉淀，4℃ 12,000rpm 离心 5 分钟 ,取上清蓝色溶液部分为APC蛋白溶液；

3）将APC蛋白活化试剂溶解于ddH2O，配制成5mg/ml溶液，按照每毫克APC蛋白加入100ul的比例加入到APC蛋白溶液，室温避光反应2小时；

4）反应完毕，通过超滤管离心4次，每次120，00rpm 5min,置换为标记缓冲液,以去除游离的APC蛋白活化试剂，滤芯内溶液即为活化APC蛋白。

2.活化APC蛋白与抗体偶联

1）活化APC蛋白浓度调整为5mg/ml；

2）将修饰抗体与活化APC蛋白，按照质量比1:2比例（每毫克修饰抗体对应2毫克活化APC蛋白）混合，室温避光反应2小时；

3）将封闭试剂管中加入200ul DMSO,配置成10mg/ml封闭试剂溶液；按照每毫克抗体3.4ul的体积加入步骤2）反应产物中，封闭未反应完的活性基团；

4）标记好的抗体分装，4℃保存备用，或加入适当保护剂，-20℃保存备用。

注意事项：

1）本试剂盒中抗体修饰试剂为高活性试剂，请-20℃保存；其余成份2-8℃保存、勿冻存。

2）试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒，会使液体或干粉试剂粘到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理，以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。

3）本试剂盒中APC蛋白需要避光低温保存，标记过程尽量保证其避光；

4）封闭剂需现用现配，干粉溶解后不能长期保存；

5）使用本试剂盒标记抗体，其抗体特异性要高，纯度不低于90%，最好使用单克隆抗体，溶液环境不含游离氨基，最好为PBS溶液；标记前抗体需去除NaN3和BSA，抗体的透析、浓缩和浓度测定等操作都会造成抗体量的损失，因此标记前准备抗体时需根据具体情况考虑最适的抗体量；

6）由于抗体修饰后所带的基团容易被重新氧化，因此修饰后抗体需尽快与活化的APC进行偶联；

7）本试剂盒中的超滤管为特殊处理的，可有效避免荧光淬灭和蛋白吸附损失，市面超滤管可能会对标记效率造成影响。

8）本试剂盒中部分试剂为高活性试剂，对皮肤和身体有一定的危害，请全程戴手套操作；DMSO属微毒类，对人体皮肤有渗透性，对眼有刺激作用，使用时避免与皮肤、眼睛和粘膜接触。