安必奇生物推出基于Red同源重组和CRISPR/Cas9的毕赤酵母基因组编辑服务。成熟的毕赤酵母（Pichia pastoris）编辑体系，助您成功实现基因敲除、基因插入和点突变。

基于Red同源重组法的毕赤酵母基因组改造

毕赤酵母基因敲除的传统方法是利用自身的Red系统对外源进入的DNA进行同源重组，从而实现目标基因的等位替换。通过设计靶基因的同源融合片段，将其克隆至自杀载体中，自杀载体通过接合输入到靶细菌。通过抗生素筛选细菌基因组靶位点整合有自杀载体的插入突变株。在第二轮反向选择压力下，只有毕赤酵母基因组发生第二次同源重组并丢失自杀质粒才可以存活。

基于CRISPR/Cas9平台的毕赤酵母基因组改造

CRISPR/Cas9系统是细菌和古细菌特有的一种天然防御系统,用于抵抗病毒或外源性质粒的侵害。安必奇生物科技推出CRISPR方法进行毕赤酵母基因组改造服务（包括基因敲除、定点突变、定点插入外源序列等）。相比于传统的基因敲除方法，该方法速度快，无痕；非常便于后续的实验研究。

研究内容

• 毕赤酵母基因敲除（Pichia pastoris gene knockout）

• 毕赤酵母基因敲入（Pichia pastoris gene knockin）

• 毕赤酵母基因点突变（Pichia pastoris gene point mutation）

服务优势

• 无痕编辑

• 有效准确

• 多基因编辑：能同时敲除多达3个基因

• 便于筛选：不要求靶细菌具有抗生素抗性

• 结果精确：测序鉴定

• 周期快：3周交付

• 定制服务：模式菌株或者宿主菌株

• 定制服务：开发特殊物种的基因组编辑系统

客户提供信息

• 毕赤酵母宿主菌株信息

• 靶基因的ID或靶序列

下游应用

• 抗生素及重要工业用酶

• 发现新的基因功能

• 优化代谢通路，提升代谢产物产量，实现工业化生产

参考文献：

• Selle K, Barrangou R. Harnessing CRISPR–Cas systems for bacterial genome editing[J]. Trends in microbiology, 2015, 23(4): 225-232.

• Zerbini, F., Zanella, I., Fraccascia, D., König, E., Irene, C., & Frattini, L. F., et al. (2017). Large scale validation of an efficient CRISPR/Cas-based multi gene editing protocol in Escherichia coli. Microbial Cell Factories, 16(1), 68.