T7核酸内切酶 I

产品及特点

T7 核酸内切酶 I 识别并切割不完全配对DNA、十字型结构 DNA、Holliday 结构或交叉 DNA、异源双链DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的双链 DNA。该酶切割错配碱基 5 端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。其反应原理图如下：

本产品具体有下列特点：

1. 识别错配 DNA

2. 分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA

3. 检测或切割异源二聚体 DNA 和切刻 DNA

4. 随机切割线性 DNA 进行 shot-gun 克隆

反应条件

1 X Buffer [50 mM NaCl，10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2 ，1 mM DTT(pH 7.9 @ 25℃) ]，37℃ 温育。

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系，37℃ 条件下，1小时将 90% 以上的 1 μg 超螺旋十字型结构的 pUC (AT) * 转化成 90% 以上的线性结构所需要的酶量。* pUC (AT) 来自 pUC19，在其 EcoRI 和 PstI 位点之间的多克隆位点处有修改。

Buffer 成分

20 mM Tris-HCl，200 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50%Glycerol，0.15% Triton® X-100，pH 7.5 @ 25℃

备注

T7 核酸内切酶 I 是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。反应温度超过 42 ℃时，会增加非特异性核酸酶活性。

参考文献

(1) Xu, M.-Q and Evans, T.C. （2001） Methods, 24, 257–277.

(2) Parkinson, M.J. and Lilley, D.M.J. （1997） J. Mol. Biol.,270, 169–178.

(3) White, M.F. et al. （1997） J. Mol. Biol., 269, 647–664.

(4) Hadden, J.M. et al. （2001） Nat. Struct. Biol., 8, 62–67.