IV style="POSITION: relative; TEXT-ALIGN: left; PADDING-BOTTOM: 0px; TEXT-TRANSFORM: none; BACKGROUND-COLOR: rgb(255,255,255); TEXT-INDENT: 0px; MARGIN: 0px 0px 16px; PADDING-LEFT: 0px; LETTER-SPACING: normal; PADDING-RIGHT: 0px; FONT: 14px Verdana, Arial, Tahoma; MAX-WIDTH: 620px; WHITE-SPACE: normal; COLOR: rgb(51,51,51); WORD-SPACING: 0px; PADDING-TOP: 0px; -webkit-text-stroke-width: 0px" class=main-title>
pColdIII载体基本信息
出品公司:载体名称:质粒类型:表达水平:启动子:克隆方法:载体大小:5 测序引物及序列:3 测序引物及序列:载体标签:载体抗性:备注:产品目录号:稳定性:组成型:病毒/非病毒:
Takara
pCold III, pColdIII, pCold-III
大肠杆菌蛋白表达载体
高
CSPA
多克隆位点，限制性内切酶
4377 bp
pCold-F: 5-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3
pCold-R: 5-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3
/
Ampicillin 氨苄
温度诱导，冷休克蛋白表达载体
3363
瞬时表达 Transient
诱导表达
非病毒
pColdIII载体质粒图谱和多克隆位点信息


pColdIII载体简介
阐明蛋白质的结构和功能是后基因组研究的一个重要课题。高效率的蛋白质表达系统是研究这些课题的不可缺少的基本技术。大肠杆菌作为宿主的表达系统中被广泛 使用于生产重组蛋白。大肠杆菌表达系统具有良好的优势,方法简单，成本低。然而，对于某些基因，蛋白表达很困难，表达的蛋白质不溶。

为了解决这些问题，TAKARA与Masayori Inouye教授（美国新泽西医学和牙科大学）进行联合研究，以制定一个高效基于低温冷休克蛋白基因的大肠杆菌表达载体。pCold DNA系列产品具有上述的优点，并提供了一个重要功能和结构的分析以及其他蛋白质研究领域的工具。

<产品概况和特点>
当培养的大肠杆菌的温度充分降低，几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少，而此时一组蛋白质称为“冷休克蛋白”被专门诱导表达。

冷休克表达载体，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5非翻译区（5UTR），翻译增强元件（TEE），His标签序列，Xa因 子切割位点和多克隆位点（MCS）位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子，大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的 pCold载体，他们的下列原件的位置稍有不同，TEE，His标签序列和Factor XA酶切位点。
pColdIII载体序列
LOCUS       pCold\III                4377 bp    DNA     circular SYN 10-AUG-2004 
DEFINITION  Expression vector pColdIII DNA, complete sequence. 
ACCESSION   AB186390 
VERSION     AB186390.1  GI:51090253 
KEYWORDS    . 
SOURCE      Expression vector pColdIII 
  ORGANISM  Expression vector pColdIII 
            other sequences; artificial sequences; vectors. 
COMMENT     This file is created by Vector NTI 
            http://www.biofeng.com/ 
COMMENT     VNTAUTHORNAME|biofeng.com| 
FEATURES             Location/Qualifiers 
     source          1..4377 
                     /organism="Expression vector pColdIII" 
                     /mol_type="other DNA" 
                     /db_xref="taxon:289231" 
                     /lab_host="Escherichia coli" 
                     /note="expresses an open reading frame as a fusion to the 
                     translation enhancing element. This plasmid is derived 
                     from pUC118." 
     gene            15..482 
                     /gene="cspA" 
     promoter        15..81 
                     /gene="cspA" 
     misc_feature    82..121 
                     /gene="cspA" 
                     /note="synthetic lac operator sequence" 
     5UTR           122..255 
                     /gene="cspA" 
                     /note="modified cspA 5UTR" 
     misc_feature    256..270 
                     /gene="cspA" 
                     /note="TEE (translation enhancing element)" 
     misc_feature    271..330 
                     /gene="cspA" 
                     /note="MCS = Multiple cloning sites contain the follow 
                     restriction sites: NdeI, SacI, KpnI, XhoI, BamHI, EcoRI, 
                     HindIII, SalI, PstI, XbaI" 
     3UTR           338..482 
                     /gene="cspA" 
                     /note="cspA 3UTR" 
     misc_feature    complement(681..1154) 
                     /note="M13 intergenic region" 
     gene            1341..2201 
                     /gene="Amp" 
     CDS             1341..2201 
                     /gene="Amp" 
                     /codon_start=1 
                     /transl_table=11 
                     /product="beta-lactamase" 
                     /protein_id="BAD35138.1" 
                     /db_xref="GI:51090254" 
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY 
                     IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE 
                     YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL 
                     DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL 
                     LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA 
                     EIGASLIKHW" 
     rep_origin      2361..2975 
                     /note="ColE1 origin" 
     gene            complement(3132..4214) 
                     /gene="lacI" 
     CDS             complement(3132..4214) 
                     /gene="lacI" 
                     /codon_start=1 
                     /transl_table=11 
                     /product="lactose operon repressor" 
                     /protein_id="BAD35139.1" 
                     /db_xref="GI:51090255" 
                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAE 
                     LNYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERS 
                     GVEACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSII 
                     FSHEDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREG 
                     DWSAMSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDT 
                     EDSSCYIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNT 
                     QTASPRALADSLMQLARQVSRLESGQ" 
ORIGIN       
        1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa 
       61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat 
      121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt 
      181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt 
      241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catatggagc tcggtaccct cgagggatcc 
      301 gaattcaagc ttgtcgacct gcagtctaga taggtaatct ctgcttaaaa gcacagaatc 
      361 taagatccct gccatttggc ggggattttt ttatttgttt tcaggaaata aataatcgat 
      421 cgcgtaataa aatctattat tatttttgtg aagaataaat ttgggtgcaa tgagaatgcg 
      481 caggcccttt cgtctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct 
      541 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg 
      601 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat 
      661 tgtactgaga gtgcaccata aaattgtaaa cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa 
      721 tttttgttaa atcagctcat tttttaacca ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa 
      781 atcaaaagaa tagcccgaga tagggttgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact 
      841 attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc 
      901 actacgtgaa ccatcaccca aatcaagttt tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa 
      961 tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc 
     1021 gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt 
     1081 cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtacta 
     1141 tggttgcttt gacgtatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc 
     1201 atcaggcgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt 
     1261 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat 
     1321 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt 
     1381 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg 
     1441 ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga 
     1501 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc 
     1561 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac 
     1621 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg 
     1681 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca 
     1741 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg 
     1801 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg 
     1861 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg 
     1921 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag 
     1981 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg 
     2041 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct 
     2101 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac 
     2161 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact 
     2221 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga 
     2281 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt 
     2341 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct 
     2401 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc 
     2461 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgttc 
     2521 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc 
     2581 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg 
     2641 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt 
     2701 cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg 
     2761 agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg 
     2821 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt 
     2881 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag 
     2941 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt 
     3001 gctggccttt tgctcacata gtcatgcccc gcgcccaccg gaaggagctg actgggttga 
     3061 aggctctcaa gggcatcggt cgagatcccg gtgcctaatg agtgagctaa cttacattaa 
     3121 ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat 
     3181 gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgccagggt ggtttttctt 
     3241 ttcaccagtg agacgggcaa cagctgattg cccttcaccg cctggccctg agagagttgc 
     3301 agcaagcggt ccacgctggt ttgccccagc aggcgaaaat cctgtttgat ggtggttaac 
     3361 ggcgggatat aacatgagct gtcttcggta tcgtcgtatc ccactaccga gatatccgca 
     3421 ccaacgcgca gcccggactc ggtaatggcg cgcattgcgc ccagcgccat ctgatcgttg 
     3481 gcaaccagca tcgcagtggg aacgatgccc tcattcagca tttgcatggt ttgttgaaaa 
     3541 ccggacatgg cactccagtc gccttcccgt tccgctatcg gctgaatttg attgcgagtg 
     3601 agatatttat gccagccagc cagacgcaga cgcgccgaga cagaacttaa tgggcccgct 
     3661 aacagcgcga tttgctggtg acccaatgcg accagatgct ccacgcccag tcgcgtaccg 
     3721 tcttcatggg agaaaataat actgttgatg ggtgtctggt cagagacatc aagaaataac 
     3781 gccggaacat tagtgcaggc agcttccaca gcaatggcat cctggtcatc cagcggatag 
     3841 ttaatgatca gcccactgac gcgttgcgcg agaagattgt gcaccgccgc tttacaggct 
     3901 tcgacgccgc ttcgttctac catcgacacc accacgctgg cacccagttg atcggcgcga 
     3961 gatttaatcg ccgcgacaat ttgcgacggc gcgtgcaggg ccagactgga ggtggcaacg 
     4021 ccaatcagca acgactgttt gcccgccagt tgttgtgcca cgcggttggg aatgtaattc 
     4081 agctccgcca tcgccgcttc cactttttcc cgcgttttcg cagaaacgtg gctggcctgg 
     4141 ttcaccacgc gggaaacggt ctgataagag acaccggcat actctgcgac atcgtataac 
     4201 gttactggtt tcacattcac caccctgaat tgactctctt ccgggcgcta tcatgccata 
     4261 ccgcgaaagg ttttgcgcca ttcgatggtg tccgggatct cgacgctctc ccttatgcga 
     4321 ctcctgcatt aggaagcagc ccagtagtag gttgaggccg ttgagcaccg ccgccgc 
//