MSCgo™成脂诱导分化试剂
产品名称： MSCgo™成脂诱导分化试剂
英文名称： MSCgo™ Adipogenic Differentiation Basal Medium
产品编号： 05-330，05-331，05-332
产品价格： 0
产品产地： 以色列
品牌商标： Biological industries（BI）
更新时间： null
使用范围： null
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产品描述
MSCgo™Adipogenic Differentiation Medium间充质干细胞成脂诱导分化培养基，无血清，无异源成分，即用型，适用于不同来源的hMSC，如骨髓、脂肪组织和脐带组织（hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT）。
成脂结果
成脂分化后的hMSC会成球状，并且伴随有脂滴累积，该现象可透过倒置显微镜观察。不同的细胞来源 (类型、年龄、代数)所得到的分化细胞数会有差异。
培养基组成
MSCgo™间质干细胞成脂诱导分化培养基
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产品描述 |
储存 |
货号 |
规格 |
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MSCgo™ Adipogenic Differentiation Basal Medium |
2-8°C |
05-330-1B |
100ml |
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MSCgo™ AdipogenicSF,XF Supplement Mix I |
-20°C |
05-331-1-01 |
0.1ml |
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MSCgo™ AdipogenicSF,XF Supplement Mix II |
-20°C |
05-332-1-15 |
1.5ml |
完全分化培养基配制
1 室温下解冻2个Supplement Mix。
2 将0.1ml Supplement Mix I与 1.5ml Supplement Mix II 加入到100ml Adipogenic Basal Medium 中，于2-8°C储存。
3 完全培养基可在2-8°C储存一个月。
成脂实验所需材料
维持培养基
MSC NutriStem® XF Medium: BI；05-200-1，05-201-1
注：若您有MSC血清或者其他培养试剂也可使用。
MSC Attachment solution XF : BI；05-752-1
分化培养基
MSCgo™ Adipogenic Differentiation Medium：05-330-1 ，05-331-1，05-332-1
染色试剂（可选）
Oil Red O，Sigma；O0625。建议选择Vivacell品牌，间充质干细胞成脂分化染色试剂盒，货号：C37A00150。
成脂诱导分化操作
以维持培养基接种hMSC
1 用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF，接种6x104细胞（3x104 cells/cm2）。
此处仅为针对成脂诱导的细胞接种操作，MSC NutriStem® XF Medium详细操作步骤请参考其说明书。
2 置于37°C，5% CO2细胞培养箱中培养。
以成脂分化培养基诱导分化
1 培养24h后确认细胞融合度达到80-90%，将维持培养基吸除，每孔（24孔盘）加入0.5ml分化培养基。
注：若细胞融合度<80%，继续再培养一天。
2 置于37°C，5% CO2细胞培养箱中培养14-21天，期间培养基的换液请参照以下建议。
不同hMSC类型的培养基换液方法
不同来源的hMSC具有不同的多向分化潜能。例如，hMSC-AT所需的诱导期较短 (~ 6天)，而hMSC-BM和hMSC-CT则需要约10天的诱导期。
不同来源干细胞有不同建议，请参考下面说明。
由于脂肪细胞是脆弱的，移液要非常小心，避免将液体直接加到脂肪细胞上。
细胞诱导完成后，使用维持培养基培养。
hMSC-AT（脂肪来源）:
一个分化周期/分化培养基 ->维持培养基
l 使用完全分化培养基培养6-8天，期间每3-4天换液。
l 分化完成后，换液成维持培养基，继续培养3-4天。
l 观察到成熟脂肪细胞（即脂滴的形成），即可染色。
hMSC-BM（骨髓来源）：
一个分化周期/分化培养基 ->维持培养基
l 使用完全分化培养基培养8-12天，期间每3-4天换液。
l 分化完成后，换液成维持培养基，继续培养3-4天。
l观察到成熟脂肪细胞（即脂滴的形成），即可染色。
hMSC-CT（脐带来源）：
至少两个分化周期/分化培养基 ->维持培养基
l 使用完全分化培养基培养5-10天，期间每3-4天换液。
l 分化期间，若细胞开始变圆、不贴壁，换液成维持培养基，培养3-6天，每2-4天换液。
l 再重复诱导分化步骤，直到观察到成熟脂肪细胞（即脂滴的形成），即可染色。
Oil red-O 染色分析 （可选）
Oil red-O 用于染色脂滴。
Oil red-O 染色储存液制备
l 将0.35g Oil Red-O (Sigma；O0625) 溶解到100ml异丙醇（>99.5%）中。
l 用0.2 或 0.45 μm PTFE 滤膜（如：Minisart SRP 17575）过滤。
l 溶液置于2-8°C储存一年。
Oil red-O 染色工作液制备
l 将6ml Oil red-O染色储存液与4ml 蒸馏水混合。
l 混合均匀，室温下静置10-20分钟。
l 用0.2 或 0.45 μm PTFE 滤膜(如：Minisart SRP 17575)过滤。
l 2-3 小时内使用。
Oil red-O 染色过程
l 吸除培养基，用DPBS洗一次（1ml/well, 24孔盘）
l 固定：吸除DPBS，加入10% 福尔马林（4% 甲醛；1ml/well, 24孔盘）。室温固定30-60分钟。
l 吸除福尔马林，用60%的异丙醇洗涤2-3分钟（1ml/well, 24孔盘）。
l 吸除异丙醇，加入Oil red-O 染色工作液（1ml/well, 24孔盘）。
l 室温静置10-30分钟。
l 用蒸馏水洗涤，去除多余的染料。
l 置于显微镜下观察成脂染色效果及图像采集。
半定量Oil red-O 染色 （可选）
l 用异丙醇（>99.5%）洗涤染料（0.5ml/well, 24孔盘）。
l 室温下静置1小时。
l 确定所有Oil red-O溶解在溶液中。
l 500nm 测OD值（>99.5% 异丙醇作为空白对照）。
产品官网链接：https://www.bioind.com/worldwide/adipogenic-differentiation-media/