HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
产品信息
产品名称
产品编号
规格
储存
价格（元）
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
11135ES50
50 T
-20℃
626.00 
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
11135ES70
200 T
-20℃
1836.00 
产品描述
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase开发的试剂盒。与HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase相比，HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达12 kb的cDNA。
试剂盒中包含由总RNA或mRNA合成高质量第一链cDNA所需的所有成分，并提供两种cDNA合成引物：Random Primers和oligo (dT)18，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分
编号
组分
产品编号/规格
11135ES50 (50 T)
11135ES70 (200 T)
11135-A
RNase free ddH2O
1 mL
2×1.2 mL
11135-B
5×HifairTM Ⅲ Buffer
200 μL
2×400 μL
11135-C
HifairTM Ⅲ Enzyme Mix
100 μL
2×200 μL
11135-D
Oligo (dT)18 (50 μM) 
50 μL
200 μL
11135-E
Random Primers (50 ng/μL)
50 μL
200 μL
【注】：1）5×HifairTM Ⅲ Buffer包含dNTP；
2）HifairTM Ⅲ Enzyme Mix中包含RNase inhibitor。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
引物选择
1. 若后续为PCR实验
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18 ，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。 
2）基因特异性引物(GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成时，可改用Oligo (dT)18或Random Primers重新进行逆转录。 
3）Random Primers特异性较低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可作为Random Primers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，且使用Oligo (dT)18或基因特异性引物(GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random Primers作为引物。
2. 若后续为qPCR实验
建议将Oligo (dT)18和Random Primers混合使用，可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成，有助于提高定量结果的重复性。

第一链cDNA合成操作步骤
一、若后续为PCR实验
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
组分
使用量
RNase free ddH2O
to 14 μL
Oligo (dT)18 (50 μM) 
or Random Primers (50 ng/μL)  
or Gene Specific Primers (2 μM)
1 μL
or 1 μL
or 1 μL
模板RNA
Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
组分
使用量
上一步的反应液
14 μL
5×HifairTM Ⅲ Buffer
4 μL
HifairTM Ⅲ Enzyme Mix
2 μL
3. 逆转录程序设置
TUNEology 波长可调检测卡盒-->