中性蛋白酶测定试剂盒 微量法
产品名称: 中性蛋白酶测定试剂盒 微量法
英文名称: Micro Neutral Proteinase Assay Kit
产品编号: BC2295
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标: Solarbio
更新时间: 2023-08-11T10:26:26
使用范围: null
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产品内容:
提取液:液体55mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加4mL蒸馏水溶解。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入4mL提取液,沸水浴中磁力搅拌溶解。
试剂三:液体20ml×1瓶, 4℃保存。
试剂四:液体4mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体1mL×1支,0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液,4℃保存。
产品说明:
NP在一定的温度和中性pH条件下,催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点,中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。
中性条件下,NP催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸收峰。
试验所需自备仪器和样品:
研钵、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP管和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
称约0.1g组织,加入1mL提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心10min,取上清,即粗酶液,置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品,加入1mL提取液,置冰上待测。
二、测定:
1.分光光度计预热30min以上,调节波长到680 nm,蒸馏水调零。
2.试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。
3.样本测定(在1.5mLEP管中依次加入下列试剂)
试剂名称(μL)
对照管
测定管
空白管
标准管
粗酶液
20
20
试剂一
40
试剂二
40
混匀后30℃水浴保温10min
试剂一
40
试剂二
40
混匀后10000rpm 4℃离心10min,取上清
上清
40
40
蒸馏水
40
标准品
40
试剂三
200
200
200
200
试剂四
40
40
40
40
混匀后30℃水浴保温20min
取1mL于1mL玻璃比色皿中,在680nm测定光吸收,分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。
三、中性蛋白酶活性计算:
(1)按蛋白浓度计算
NP活性单位(U)定义:30℃每毫克蛋白每分钟水解产生1μmol酪氨酸。
NP活性(U/mg prot)
=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V1÷(Cpr×V2)÷T
=0.125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
AP活性单位(U)定义:30℃每克样品每分钟催化水解产生1 μ mol酪氨酸。
AP活性(U/g)TUNEology 波长可调检测卡盒-->