BL21(DE3)pLysS 感受态细胞 BL21(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

产品规格: BL21(DE3)pLysS 10×100μl pUC19（control vector） 10pg/μl 10μl F - ompT hsdS(rB -mB -) gal dcm(DE3)pLysS Camr  High5TM 系列 BL21(DE3)pLysS 感受态细胞携带 pLysS 质粒，具有氯霉素抗性。 pLysS 含有表达 T7 溶菌酶的基因，T7 溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，能 够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰 IPTG 诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 该菌株染色体整合了λ噬菌体 DE3 区（DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶），High5TM 系列 BL21(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作经 pUC19 质粒检测转化效率高达 108cfu/μg。 1. 取 100μl 冰上融化的 L21(DE3)pLysS 感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。 2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200rpm 复苏 60 分 钟。 4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含 34 µg/ml 氯霉素及所 选质粒筛选抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。 5.将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。 1. 感受态细胞最好在冰上融化。 2. 混入质粒时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 4. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。 5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。 6. BL21(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS 质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均 应含有 34 µg/ml 氯霉素，以防质粒丢失。