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BC0290-50管/48样
Solarbio 
50管/48样 
720.00元 
 
产品组成： 
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。 
试剂一：冰乙酸 4℃保存。（自备） 
试剂二：液体 45mL×1 瓶， 4℃保存。 
试剂三：甲苯 4℃保存。（自备） 
标准品：脯氨酸 10mg，4℃保存。 
 
产品说明： 
脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内 Pro 含量显 著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此， 脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。 用磺基水杨酸（SA）提取 Pro，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色；加甲苯萃 取后，在 520nm 测定吸光度。 
需自备的仪器和用品： 
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰乙酸、甲苯、研 钵、冰和蒸馏水。 
 
样品测定的准备： 
1、细胞、细菌或组织样品的制备 ： 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每 100 万细菌或细胞加入 1mL 提取液， 超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），之后置沸水浴振荡提取 10min；10000g，常温离心 10min，取上清，冷却后待测。 组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取 10min，10000g， 常温离心 10min，取上清，冷却后待测。 
2、血清（浆）样品：取 100μL 血清（浆）加入 1mL 提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取 10 分钟，10000g，常温离心 10 分钟，取上清，冷却后待测。 
3、标准品的处理:称取 1mg，将标准品稀释为 15、10、8、6、4、2、1、0 g/ml。 
测定步骤： 
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 520nm，蒸馏水调零。 
2、取 0.5mL 上清液（或稀释后的标准品）+0.5mL 试剂一+0.5mL 试剂二于有盖试管中，置沸水浴 中保温 30min（盖紧，防止水分散失），每 10min 振荡一次。
3、待冷却后，在试管中加入 1mL 试剂三，振荡 30s，静置片刻，使色素转至试剂三中；吸取 0.8mL-1mL 上层溶液于 1mL 玻璃比色皿中，用试剂三调零，于 520nm 波长处比色，记录吸光值。 
4、根据标准品吸光值和浓度，建立标准曲线。
 
Pro含量计算： 
1、通过标准曲线计算样品脯氨酸含量(y 为脯氨酸含量，μg/mL；x 为 OD 值) 
2、按照细菌、细胞个数或者组织鲜重计算，首先根据标准曲线求得 y 值： 细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/104cell)= y÷细胞浓度(104cell/mL) Pro 含量(μg/gmass)=y÷样本鲜重(g/mL)
3、血清（浆）中脯氨酸含量，首先根据标准曲线求得 y 值： Pro 含量[μg/mL 血清（浆）]=y÷0.1mL 血清（浆）/mL 
注意：提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。
 
相关文献：
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