核酸内切酶 III（Nth）

产品及特点

E. coli 核酸内切酶 III (Nth) 既有 N-糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性，占E.coliAP酶总活性的90%。N-糖基化酶活性可释放双链 DNA 上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶 (AP) 位点。AP-裂解酶活性则切割 AP 位点的 3 端，产生一个 5 磷酸和一个3 磷酸-α,β不饱和醛。被核酸内切酶 III 识别并切除的受损碱基包括：尿素、5,6 二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二羟基胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲。其反应示意图如下：

具体有下列特点：

1. 单细胞凝胶电泳 (彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数1：104～1：105

2. 碱性析出

3. 碱解旋

反应条件

1X Endonuclease III (Nth) 反应缓冲液 [20 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，1mM DTT (pH 8.0 @ 25℃) ]， 37℃ 温育。

单位定义

1 单位指在 10 μl 缓冲液体系中，37℃ 条件下，1 小时内能够切割 1 pmol 含一个 AP 位点*的 34 bp 寡核苷酸双链所需要的酶量。 AP 位点的创建方法如下：37℃条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶 (UDG)处理 10 pmol 含单一尿嘧啶碱基的34 bp 寡核苷酸双链 2 分钟。Buffer 成分

10 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，200 μg/mlBSA，50% Glycerol

热失活

65℃ 20 分钟。

参考文献

(1) Dizdaroglu, M. Laval, J. and Boiteux, S. （1993）Biochemistry, 32,

12105–12111.

(2) Hatahet, Z. et al.（1994）J. Biol. Chem., 269, 18814–18820.

(3) Singh, N. et al..（1988） Experimental Cell Research, 175,184–191.

(4) Collins, A. et al. （1993） Carcinogenesis, 14, 1733–1735.

(5) Collins, A. et al. （1996） Environmental HealthPerspectives, 104,465–469.

(6) Pflaum, M. et al. （1998）Free Rad. Res., 29, 585–594