产品组成

产品介绍

本试剂盒可以快速地从细胞、组织、全血、骨髓、体液、细菌、病毒等样本中提取总 RNA 。本产品 仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品级化妆品等用途。

存储条件

室温干燥保存可至少稳定 24 个月。

需要额外准备的材料

□  无水乙醇（96%-100%）

□  无 RNase 酶的 1.5ml 离心管

□  无 RNase 酶的枪头

□ 干净的手套 □  离心机

开始前注意事项

□ Buffer RFL 在储存时可能会形成沉淀，  如果有沉淀出现，请 37-56℃加热溶解后室温使用。

□ Buffer RPE 作为浓缩液提供，在第一次使用前加入 4 倍体积的乙醇（96-100％）以获得工作溶液。

□ RNase-free 水中不含任何抑菌因子， 室温放置或操作时可能会引入细菌或真菌污染， 使用时尽量注意， 推荐开瓶后分装保存以减少污染风险保证实验稳定性。

□ RNA 在 Buffer RFL 中时不会被 RNase 降解（短时操作过程中） 。但提取后继续处理过程中应使用不 含 RNase 的无酶离心管或玻璃器皿。

操作步骤：

1.     请根据样品种类进行以下步骤

a.  动物细胞：悬浮细胞离心后留下细胞团块和适量上清（200μl/2×106  细胞），充分震 荡直至没有细胞团块（重要），取 200μl 放入无酶离心管中备用。若是贴壁细胞则 消化收集细胞后用 200μl PBS 重悬。

注意：收集细胞数量不要超过 1×107，收集细胞时一定要将细胞培养基去除干净，否则会导致细胞裂解不完全影 响 RNA 与吸附柱的结合， 导致 RNA 的产量降低。

b.  动物组织：将 10mg-30mg 动物组织转移入 1.5ml 无酶离心管中并加入 600μl  Buffer RFL（动物组织量不超过 30mg），使用研磨杵或电动研磨机将动物组织彻底研磨 匀浆。最大转速(~13,400×g)  离心 3min。收集上清 200μl 用于提取。

匀浆时间根据样本裂解难易程度决定，亦可匀浆后静置 3-5min 延长裂解时间（期间颠倒吹匀 2-3 次）。

c.  体液及其它液体样本处理： 尿液、腹水、胸水、脑积液等根据需要取 1-10ml，离心 2min，留下沉淀及约 200μl 上清，充分震荡悬浮沉淀；有时也可以直接取样本 200μl；

d.  细菌：培养良好的细菌菌液 1ml，离心后留下细菌团块及大约 100μl 上清，充分振荡 悬浮细菌，直至没有细胞团块（重要）。

e.  抗凝全血：1 倍体积全血加入 5 倍体积红细胞裂解液（或 Buffer EL），冰上裂解 10-15 分钟，4°C 下以 400×g 离心 10min，然后完全去除并丢弃上清液，加入 200μl  PBS 充分重悬白细胞至无细胞团后用于提取。

2.     将上述处理好的样品加入 500μl Buffer RFL ，充分颠倒混匀(或涡旋)1min。

若细胞量过大裂解后有明显沉淀， 可最大转速(~13,400×g)离心 2 分钟取上清进行下一步操作。

3.     将上述步骤混匀后的溶液转移入 RNase-free  吸附柱中并套上 2ml  收集管，

≥8000×g(≥10,000 rpm)离心 30s ，弃废液。

吸附柱最大上柱量为 700μl，若溶液过多可分多次上柱。后续操作若无特殊说明吸附柱均置于 2ml 收集管中。

4.      向吸附柱中加入 500μl Buffer RPE ，≥8000×g(≥10,000 rpm)离心 30s，弃废液。

5.     重复上述步骤 4 一次。

6.     倒弃滤液，将吸附柱放入收集管中,   以最大转速(~13,400×g)离心 2min 干燥柱膜。

并将吸附柱取出套入新的无酶 1.5ml 离心管中，

若吸附柱中残留乙醇，可开盖静置 3 分钟挥发去除， 以防止对纯化后的 RNA 的下游实验造成影响。

7.      向吸附柱膜正中央加入 30-50μl RNase-free Water，盖上盖子室温静置 30-60sßß。

后置于离心机中 ≥12,000×g(≥13,000 rpm)  离心 1-2min 得到 RNA 溶液。

RNA 洗脱体积不应少于 30μl，否则影响洗脱效率。洗脱后的 RNA 溶液应置于-80℃储存。若需长时间保存 RNA 溶液稳定不降解，可适量添加 RNA Chill (ES-8520)可更长时间保存 RNA。