HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)
产品名称： HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)
英文名称： HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)
产品编号： 11141ES70
产品价格： 0
产品产地： Yeasen
品牌商标： Yeasen
更新时间： 2023-08-17T13:40:59
使用范围： null
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HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR
(gDNA digester plus)
产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
储存 |
价格（元） |
|
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) |
11141ES10 |
10T |
-20℃ |
326 |
|
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) |
11141ES50 |
50 T |
-20℃ |
826.00 |
|
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) |
11141ES70 |
200 T |
-20℃ |
2316.00 |
产品描述
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于 HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。与HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase相比，HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。
该预混液包含gDNA digester 和2×HifairTM Ⅲ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。2×HifairTM Ⅲ SuperMix plus 含有逆转录反应所需的所有组分（Buffer，dNTP，HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase，RNase inhibitor，Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix），只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应，并同时终止gDNA digester的作用，保证cDNA的完整性。
该产品适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行特别优化，比例优化的Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR®Green和探针法qPCR，可以根据实验目的，选择UNICONTM qPCR SYBR® Green Master Mix，HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix或HieffTM qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。
产品组分
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编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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11141ES50 (50 T) |
11141ES70 (200 T) |
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11141-A |
RNase-free ddH2O |
1 mL |
2×1.2 mL |
|
11141-B |
5×gDNA digester Buffer |
100 μL |
400 μL |
|
11141-C |
gDNA digester |
50 μL |
200 μL |
|
11141-D |
2×HifairTM Ⅲ SuperMix plus |
500 μL |
2×1 mL |
【注】：2×HifairTM Ⅲ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。
产品应用
适用于两步法RT-qPCR。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
第一链cDNA合成操作步骤
1. 残留基因组DNA去除
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
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组分 |
使用量 |
|
RNase free ddH2O |
To 10 μL |
|
5×gDNA digester Buffer |
2 μL |
|
gDNA digester |
1 μL |
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模板RNA |
Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng |
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
在第1步的反应管中直接加入2×HifairTM Ⅲ SuperMix plus，用移液器轻轻吹打混匀。
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组分 |
使用量 |
|
第1步的反应液 |
10 μL |
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2×HifairTM Ⅲ SuperMix plus |
10 μL |
3.逆转录程序设置
标准程序（可获得高质量的cDNA）
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温度 |
时间 |
|
25℃ |
5 min |
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50℃ |
30 min |
|
85℃ |
5 min |
或快速程序（适用于大多数RT-qPCR实验）
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温度 |
时间 |
|
50℃ |
15 min |
|
85℃ |
2 min |
【注】：逆转录温度：推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃。
※ 逆转录产物可立即用于qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
注意事项
1）gDNA digester 和2×HifairTM Ⅲ SuperMix plus含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取；
2）如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制；
3）可以不经过基因组去除步骤，直接用2×HifairTM Ⅲ SuperMix plus进行逆转录，这样所得到的结果会与使用HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat No. 11137ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11137ES中的2×HifairTM Ⅲ SuperMix配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验；
4）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；
5) 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
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产品货号 |
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