ER2566 感受态细胞

产品规格: ER2566 20×100μl pUC19(control vector) 10pg/μl 10μl F - λ- fhuA2[lon] ompT lacZ::T7gene1 gal sulA11Δ(mcrC-mrr)114::IS10R(mcr-73::miniTn10-TetS) 2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]High5 TM 系列 ER2566 感受态细胞为 lon 和 ompT 蛋白酶缺陷菌株。 膜外蛋白酶 OMPT 的缺失能够有效防止表达的异源目的蛋白在细菌体内的降解。 High5 TM系列 ER2566感受态细胞采用特殊化学试剂制作，可用于DNA的化学转化，经pUC19 质粒检测转化效率达 10 8cfu/μg。 1. 取 100μl 冰上融化的 ER2566 感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。 2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基(2YT 或 LB)，混匀后 37℃，200rpm 复苏 60 分钟。4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。 5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。 1 感受态细胞最好在冰上融化。 2. 混入质粒时应轻柔操作。 3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 4. 诱导时，IPTG 浓度可选(0.1-2mM 均可)。 5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。