北京厚生博泰生物技术有限公司

Beijing Hooseen biotechnology Co.,Ltd.

产品描述：

      CD3/CD28 分选激活磁珠通过磁珠表面的抗CD3 和抗CD28 单克隆抗体识别和结合T 细胞TCR， 同时提供了T 细胞激活所需的第一信号和共刺激信号。该产品适用于人T 细胞的分离、激活、以及扩增，可应用于CAR-T、UCAR-T、TCR-T、TIL 等多种T 细胞的体外培养等。

产品信息

货号：GMP-030x001

浓度：2.0x108 Beads/ml

体积：1 ml

无菌检测：无菌内毒素<2 EU/ml

使用范围：T 细胞

反应种属：人

保存温度：2~8℃

有效期：2 年

使用说明：

1. 准备细胞，如PBMC； 

2. 细胞计数、标记CD3 等T 细胞表面marker 并进行流式检测；取所需数量的细胞于离心管中，离心，去上清（如必要可重复一次），以适量完全培养基重悬细胞并使用细胞滤网过滤，备用；

3. CD3/CD28 分选激活磁珠的清洗1) 将磁珠充分混匀：颠倒混匀3~5 min（不建议涡旋混匀），再用移液枪多次轻轻吹打混匀；2) 磁珠：CD3+ T 细胞孵育比例按3：1 去计算所需的磁珠体积；根据计算好的体积取磁珠并转移到已加入适量完全培养基的离心管中（如1 mL 完全培养基于1.5 mL 离心管中）；3) 颠倒混匀清洗磁珠，磁分离时间为3~5 Min；弃上清；再加入适量完全培养基（如1 mL 完全培养基于1.5 mL 离心管中）清洗，颠倒混匀，弃上清。同上操作重复清洗3 次；弃上清，以适量完全培养基重悬磁珠备用；

4. 磁珠激活CD3+T，将上述清洗后的磁珠加入到PBMC 中，吹打混匀；如果PBMC 中的非T 细胞可能干扰后续实验结果，则在上述吹打混匀后，还需室温孵育30 min 后进行细胞分选，即在磁力架上磁分离3~5 min；弃上清（上清为CD3- T 细胞悬液），从磁力架上取下离心管并加入适量完全培养基，即为CD3+ T 细胞悬液；细胞计数。

5. 使用适量完全培养基调整至适于下一步操作的细胞密度，如0.1~1x106/ml 于细胞培养；

6. 根据需要进行病毒转导等操作；

7. 于适当日期去磁珠；

8. 根据需要可对T 细胞进行观察，细胞计数、更换培养基和调整细胞密度后置于CO2培养箱继续培养，或进行流式检测等相关实验。

注意事项：

1. 磁珠取出前需充分混匀，譬如使用前上下颠倒至无明显团块，再用移液枪轻轻吹打多次混匀；

2.  细胞-磁珠、或磁珠的磁分离时磁吸附时间要充分（为3~5 Min），达到上清液澄清状态，以减少细胞-磁珠、或磁珠的损失；

3. 磁珠与有效T 细胞比例，在实际应用中，客户可根据实际情况摸索调整；

4. 建议磁珠去除日期为Day 3 之后，譬如Day5，（以加入磁珠激活T 细胞为Day 0）；

5. 如果PBMC 中的非T 细胞不干扰后续实验结果，则PBMC 通过贴壁培养去除贴壁细胞（T 细胞不贴壁）、过滤去除死细胞，回收所得的T 细胞，建议无分选直接激活。

货号：GMP-030x001-1；1ml；3680元
货号：GMP-030x001-5；5ml；询价
货号：GMP-030x001-10；10ml；询价