Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒

产品简介：

Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit)是用FITC标记的重组人 Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白，参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。
Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。
用带有绿色荧光的荧光探针FITC标记的Annexin V，即Annexin V-FITC，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
本试剂盒还提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，Annexin V-FITC可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。

 综上所述，用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色后，正常的活细胞不被Annexin V-FITC和碘化丙啶染色；凋亡早期的细胞仅被Annexin VFITC染色，碘化丙啶染色呈阴性；坏死细胞和凋亡晚期的细胞可以同时被Annexin V-FITC和碘化丙啶染色。

储存条件：
4℃保存，Annexin V-FITC和碘化丙啶染色液需避光保存，半年有效。为长期保存，可以把碘化丙啶染色液适当分装后-20℃保存，Annexin V-FITC结合液可以直接-20℃保存。



使用说明：

a. 调整细胞密度到大约1×106细胞/ml。

b. 将0.2 ml 细胞悬液从细胞培养瓶中（2×105个细胞）转移到一个干净的离心管内。

c. 室温1000×g离心5分钟，去除培养基。

d. 将细胞用0.2 ml预冷的PBS 溶液轻轻重悬。

e.室温1000×g离心5分钟，去除PBS溶液。

f. 将细胞用0.2 ml预冷的1×结合缓冲液轻轻重悬。

g. 加入5μlAnnexin V-FITC，5ul Propidium Iodide。

h. 室温（18-24°C）避光反应10-15分钟。

i.将样本放置在冰上避光保存。

  k.用流式细胞仪或荧光显微镜检测分析。


注意事项：

1、如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。

2、染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。

3、如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，最终导致染色失败。

4、荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。



包装清单