呋喃它酮ELISA试剂盒
产品名称： 呋喃它酮ELISA试剂盒
英文名称： 呋喃它酮ELISA试剂盒
产品编号： CFC004D
产品价格： 0
产品产地： 苏州
品牌商标： 艾瑞德生物
更新时间： null
使用范围： null
苏州艾瑞德生物科技有限公司
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一、 原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的AMOZ，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的AMOZ和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃它酮代谢物的衍生物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的AMOZ含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出呋喃它酮代谢物含量。
二、 试剂盒技术指标：
试剂盒灵敏度： 0.1 ppb
样本检测下限：
组织、蜂蜜 0.2 ppb
鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰，检测下限为0.3 ppb
回收率：
鱼/虾水产组织 90%±15%
蜂蜜/鸡肉/肝脏样本 80%±15%
交叉反应率：
呋喃它酮代谢物 100%
呋喃唑酮代谢物 ﹤0.1%
呋喃妥因代谢物 ﹤0.1%
呋喃西林代谢物 ﹤0.1%
三、试剂盒组成
1．微量测试孔：96T/8孔
2．标准品液： 0 ppb 0.1 ppb 0.3 ppb 0.9 ppb 2.7 ppb 8.1 ppb （1ml/瓶）
3．酶标记物 12ml
4．抗体工作液 7ml
5．底物缓冲液 7 ml
6．底物液 7 ml
7．终止液 7 ml
8．20倍浓缩洗涤液 50 ml
9．复溶液 50 ml
10．15.1 mg衍生化试剂
四、 所用仪器、试剂
具备的仪器： 微孔酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器： 单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl
试 剂： 甲醇、氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾、邻**苯甲醛、亚**铁*化钾（K2Fe（CN）5·NO·3H2O）ZnSO4·7H2O
五、样本前处理步骤
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制：
1．衍生化试剂 称15.1 mg邻**苯甲醛加甲醇10 mL溶解(浓度10 mM)
2．C液：（供奶样用）称12.5 g亚**铁*化钾用去离子水定溶至100 mL。
D液：（供奶样用）称29.8 g 硫酸锌用去离子水溶解定溶至100 mL。
3．0.1 M K2HPO4 称22.8 g K2HPO4·3H2O
加去离子水溶解定溶至1 L
4．1M HCl取8.6 ml浓HCl加水定溶至100 mL。
5．1M NaOH称取4 g NaOH加水定溶至100 mL。
样本的处理
(a) 肉样或鱼虾
用均质器均质样本，接（d）的描述方法
(b) 奶样
1. 取出5 mL的奶样本到玻璃离心管中，分别加入C液和D液各250 µL。
2. 用振荡器充分混合样本,用恒温离心机4000 r/min以上离心10 min(4-12 ℃).若没有恒温离心机,则先将样本降温至大约8 ℃，然后离心。
3. 接(d)的描述方法
(c) 蜂蜜
1. 取1±0.05 g样本到离心管中。
2. 加入4 mL的去离子水溶解，再加入0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化试剂,充分振荡。
3. 接(d)第2步描述方法
(d)接上面的方法
1. 取1±0.05 g的均质样本(肉样/鱼虾)、牛奶的离心上清液1.1 mL（相当1 mL奶样），分别加入4 mL的去离子水，0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化试剂，充分振荡。
2. 置于56 ℃环境中孵育（2 h）。
3. 分别加入5 mL 0.1 M K2HPO4， 0.4 mL1 M NaOH和5 mL的乙酸乙酯，充分振荡30 s。
4. 在室温下（20-25 ℃）4000 r/min以上离心10 min。
5. 取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一洁净容器中于50 ℃氮气/空气吹干。
6. 用1 mL正己烷溶解干燥物，用1mL已稀释好的复溶液充分混合；在室温下（20-25 ℃）4000 r/min以上离心10 min。
7. 取50µl下层相用于分析。
样本稀释倍数：2
六、操作步骤
1． 将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2． 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。
3． 加标准品/样本50 µL /孔，然后加入抗体工作液50 µL/孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，室温反应30 min。
4． 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
5． 加入酶标记物100 µL/孔，用封板膜盖板，室温反应20 min。
6． 洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
7．显色：每孔加入底物缓冲液50µl，再加底物液50µl，轻轻振荡混匀，室温环境下避光显色10min。
8．测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450nm处（在20min内读完数据），测定吸光度值。
七、结果判定
以标准品百分吸光率为纵坐标，以AMOZ标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中AMOZ实际浓度。
八、注意事项
1．室温低于20 ℃或试剂及样本没有回到室温（20-25 ℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2．洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3．混合要均匀，洗板要彻底，否则会出现重复性不好的现象。
4．反应终止液为2 M硫酸，避免接触皮肤。
5．将不用的微孔板放进自封袋重新密封; 标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
6．不要使用过了有效日期的试剂盒，不要使用不同批号试剂盒中的试剂。
7．显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之，0标准的吸光度值小于0.6时，表示试剂可能变质。
8．该试剂盒最佳反应温度为25 ℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
九、储藏条件和保质期
储藏条件：试剂盒于2-8 ℃保存，不要冷冻。
保质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒