流式检测细胞周期（PI）

生命是从一代向下一代传递的连续过程，因此是一个不断更新、不断从头开始的过程。细胞的生命开始于产生它的母细胞的分裂, 结束于它的子细胞的形成，或是细胞的自身死亡。通常将通过细胞分裂产生的新细胞的生长开始到下一次细胞分裂形成子细胞结束为止所经历的过程称为细胞周期。在这一过程中，细胞的遗传物质复制并均等地分配给两个子细胞。

PI染色的检测：

PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。

1）PI单染色的固定方法：

1．收集细胞（1～5）×106个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。

2．3ml PBS洗一次。

3．离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。

4．离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。

5．400目的筛网过滤1次，500～1000r/min离心5min，弃去PBS。

6．用1ml PI染液，4℃避光30min。

7．流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激发光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光，可分析前散射光对侧散射光的散点图及PI荧光的直方图。

材料：

1、 PI（e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA）

2、 缓冲体系：1×PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scientific,Santa Ana,CA)+2%新鲜小牛血清＋0.1%叠氮钠

A、  PI缓冲液 用缓冲液将PI溶解至终浓度为1mg/ml中，于4℃下密封避光保存1个月。

B、PI浓缩液 用缓冲液将PI溶解至终浓度为500mg/ml，于4℃下密封避光保存。我们已经检测过将PI浓缩液放置数月后，并无观察到染色活性的丢失。

Ⅱ、方法：

将样品细胞按程序描述的方法用FITC标记的单克隆抗体进行单色染色。

A、在最后的洗涤步骤后，将样品细胞悬浮于PI缓冲液中，于4℃下密封避光保存以备通过流式细胞仪分析；

B、在最后的洗涤步骤后，如前述将样品细胞悬浮后备用。如果您想检测样品细胞活力，在每一管中加入2μl的PI浓缩液，混匀。将样品置于4℃下密封避光保存以备流式细胞仪分析。

完成时间：

接到样本1月以内。

威斯腾生物服务流程

威斯腾生物服务项目

【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！ 
【全国免费热线】400-675-6758
【电话】 023-65316016,023-65316556
【邮箱】 china-western@163.com
【官网网址】www.cqwestern.com
【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼